Plásmido Doble Nickase (h) Tafazzin: sc-403588-NIC

TAZ codifica la tafazzina, una aciltransferasa asociada a la membrana interna mitocondrial que remodela la cardiolipina para mantener la composición adecuada de cadenas acilo necesaria para la organización de la cadena respiratoria y una fosforilación oxidativa eficiente. Mediante la maduración de la cardiolipina, la tafazzina sostiene la arquitectura de las crestas mitocondriales, la dinámica de membrana y la estabilidad de los supercomplejos proteicos implicados en el transporte de electrones. La alteración de TAZ perturba la homeostasis de fosfolípidos, eleva la monolisocardiolipina y puede desplazar la bioenergética celular hacia respuestas de estrés vinculadas a una función mitocondrial deteriorada. La disfunción de TAZ se asocia estrechamente con el síndrome de Barth y se estudia con frecuencia en el contexto de cardiomiopatía, miopatía esquelética, neutropenia y defectos más amplios en la remodelación lipídica mitocondrial.

Tafazzin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TAZ en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TAZ. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TAZ. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TAZ alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.