Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tafazzin: sc-403588-ACT

Le gène humain TAZ code la tafazzine, une transacylase mitochondriale des phospholipides qui remodèle la cardiolipine afin de maintenir l’architecture de la membrane interne mitochondriale et d’optimiser la phosphorylation oxydative. En régulant la composition des chaînes acyles de la cardiolipine, la tafazzine favorise la stabilité des supercomplexes de la chaîne respiratoire, la dynamique mitochondriale et le contrôle qualité associé à la mitophagie. Une altération du remodelage lipidique médié par TAZ est liée à une dysfonction mitochondriale et à des modifications du métabolisme énergétique, avec une forte pertinence pour le syndrome de Barth ainsi que des phénotypes apparentés de cardiomyopathie et de myopathie. TAZ est donc largement étudié dans des voies reliant la bioénergétique mitochondriale, l’homéostasie redox et la signalisation lipidique membranaire.

Tafazzin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAZ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tafazzin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAZ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAZ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tafazzin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAZ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tafazzin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tafazzin dans les cellules tumorales présentant une expression de TAZ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.