T2R38 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402279

Descripción general

TAS2R38 codifica el receptor del sabor amargo T2R38, un GPCR de clase A que detecta compuestos que contienen tiourea, como PTC/PROP, y se acopla a la señalización asociada a gustducina para modular segundos mensajeros intracelulares, incluido el flujo de Ca²⁺, en células quimiosensoriales. Más allá de la percepción del gusto oral, T2R38 se expresa en epitelios extraorales, donde la señalización de receptores amargos contribuye a la vigilancia quimiosensorial y a la regulación de las respuestas epiteliales. Los haplotipos comunes de TAS2R38 modifican la sensibilidad del receptor y se han estudiado como determinantes genéticos de la percepción del sabor amargo y de la variabilidad en conductas impulsadas por señales quimiosensoriales. Como receptor sensorial acoplado a GPCR, T2R38 ofrece un modelo manejable para analizar la señalización del receptor, el control de la expresión y las relaciones genotipo–fenotipo en sistemas celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO T2R38 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TAS2R38 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TAS2R38 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TAS2R38 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína T2R38.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TAS2R38 para la investigación de la señalización de T2R38, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TAS2R38 críticos para la función de T2R38
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TAS2R38 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido T2R38 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido T2R38 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TAS2R38. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR T2R38 (h) y el plásmido HDR T2R38 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TAS2R38 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TAS2R38 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.