Plasmide CRISPR d'Activation (h) SYT: sc-401575-ACT

SS18, également appelé SYT, code un corégulateur transcriptionnel nucléaire qui s’associe aux complexes de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) afin d’influencer l’accessibilité des enhancers et des promoteurs. Grâce à ces interactions, SS18 contribue à coordonner des programmes transcriptionnels dépendants de l’ARN polymérase II, liés à l’identité cellulaire, à la différenciation et à la prolifération. SS18 est pertinent en pathologie, car des réarrangements récurrents impliquant SS18 peuvent reconfigurer la régulation de la chromatine et activer de manière aberrante l’expression de gènes inappropriés pour la lignée, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des dépendances transcriptionnelles oncogéniques. Sa fonction est couramment étudiée dans le contexte du remodelage de la chromatine, du contrôle des états épigénétiques et de la dynamique des réseaux de facteurs de transcription.

SYT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SS18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SYT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SS18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SS18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SYT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SS18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SYT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SYT dans les cellules tumorales présentant une expression de SS18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.