Plasmide CRISPR d'Activation (h) Suppressed: sc-415976-ACT

TOMM5 (translocase de la membrane externe mitochondriale 5) code un petit composant de la membrane externe des mitochondries impliqué dans l’import des protéines et le maintien de la protéostasie mitochondriale. En soutenant la biogenèse et le renouvellement des protéines mitochondriales, TOMM5 contribue à des voies qui régissent la capacité de phosphorylation oxydative, la dynamique mitochondriale et la signalisation adaptative au stress. Une perturbation des réseaux d’import mitochondrial peut influencer l’équilibre rédox, la sensibilité à l’apoptose et la signalisation de l’immunité innée convergeant vers des programmes inflammatoires. Par conséquent, TOMM5 présente un intérêt pour des études mécanistiques reliant le contrôle qualité mitochondrial au dysfonctionnement métabolique, au stress mitochondrial associé à la neurodégénérescence et au remodelage bioénergétique des cellules cancéreuses.

Tomm5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TOMM5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tomm5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TOMM5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TOMM5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tomm5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TOMM5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tomm5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tomm5 dans les cellules tumorales présentant une expression de TOMM5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.