Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMF1 (h): sc-406543

Présentation

SUMF1 code l’enzyme génératrice de formylglycine (FGE), une oxydase luminale du réticulum endoplasmique nécessaire à l’activation post-traductionnelle de toutes les sulfatases via la conversion d’une cystéine conservée en Cα‑formylglycine. Cette modification est indispensable à l’hydrolyse des esters sulfates lysosomaux et extracellulaires, reliant SUMF1 au renouvellement des glycosaminoglycanes, au métabolisme des sphingolipides et, plus largement, aux voies cataboliques dépendantes du lysosome. La perturbation de SUMF1 réduit l’activité globale des sulfatases et peut conduire à des phénotypes de surcharge lysosomale, caractérisés par une altération de l’élimination des substrats et une homéostasie cellulaire modifiée. SUMF1 est donc largement étudié dans le contexte de la biologie des sulfatases, de la fonction lysosomale et des mécanismes sous-jacents à la pathogenèse associée au déficit multiple en sulfatases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SUMF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SUMF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SUMF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUMF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SUMF1 pour l'étude de la signalisation de SUMF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SUMF1 essentiels à la fonction de SUMF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SUMF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUMF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SUMF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SUMF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUMF1 plasmide HDR (h) et le SUMF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SUMF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SUMF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.