Plasmide Double Nickase (h) Stomatin: sc-402491-NIC

Le gène humain **STOM** code la **stomatine**, une protéine d’échafaudage associée aux membranes, enrichie dans les radeaux lipidiques, qui contribue à organiser des canaux ioniques et des transporteurs au niveau de la membrane plasmique. La stomatine participe à la régulation de l’activité des canaux ioniques mécanosensibles et sensibles aux protons, à la courbure membranaire et au trafic vésiculaire, ce qui la relie à des processus cellulaires tels que l’osmorégulation et la transduction du signal. Elle est fortement exprimée dans les érythrocytes, où elle soutient la stabilité membranaire et participe à l’homéostasie des globules rouges. Une expression ou une localisation altérée de la stomatine a été associée à des troubles de la membrane des hématies, notamment la stomatocytose héréditaire, ainsi qu’à des modifications plus générales de l’excitabilité membranaire pertinentes pour la recherche en neurobiologie et en cancérologie.

Stomatin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STOM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STOM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STOM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STOM.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.