Plasmide CRISPR d'Activation (h) Stomatin: sc-402491-ACT

Le gène humain **STOM** code la stomatine, une protéine membranaire intégrale enrichie dans les radeaux lipidiques, qui module l’organisation de la membrane et l’activité des canaux ioniques, notamment via la régulation de complexes de canaux mécanorésensibles et du canal sodique épithélial (ENaC). La stomatine contribue au couplage avec le cytosquelette, au trafic vésiculaire et à une signalisation dépendante des microdomaines membranaires, influençant le contrôle du volume cellulaire et les réponses au stress. Une expression altérée de **STOM** ou une localisation membranaire perturbée a été associée à des défauts de membrane des globules rouges, tels que la stomatocytose héréditaire, et peut affecter la biomécanique cellulaire ainsi que l’homéostasie ionique. En tant qu’échafaudage associé aux radeaux, la stomatine est fréquemment étudiée dans des voies reliant la détection de la tension membranaire, le transport ionique et l’adaptation au stress inflammatoire ou métabolique.

Stomatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STOM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Stomatin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STOM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STOM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Stomatin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STOM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Stomatin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Stomatin dans les cellules tumorales présentant une expression de STOM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.