Plasmide CRISPR d'Activation (h) STELLA: sc-403261-ACT

DPPA3 (STELLA) est un facteur associé aux cellules germinales et aux tout premiers stades embryonnaires, impliqué dans la régulation épigénétique durant le développement préimplantatoire, notamment le maintien des états de méthylation de l’ADN et la protection des empreintes génomiques. Dans les cellules humaines, STELLA est liée à l’organisation de la chromatine et à des programmes transcriptionnels qui soutiennent les transitions de pluripotence, la spécification de la lignée germinale et la stabilité du génome dans des contextes de développement précoce. Son activité a été associée à la modulation de voies dépendantes de la méthylation de l’ADN et à la coordination de réseaux géniques liés au reprogrammage. Des profils d’expression dérégulés de DPPA3 ont été rapportés dans des études sur l’infertilité, des anomalies du développement et le remodelage épigénétique associé aux cancers, ce qui en fait une cible pertinente pour des investigations mécanistiques du contrôle des états cellulaires.

STELLA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DPPA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STELLA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DPPA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DPPA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STELLA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DPPA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STELLA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STELLA dans les cellules tumorales présentant une expression de DPPA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.