Plasmide CRISPR d'Activation (h) SSX1: sc-403551-ACT

SSX1 (sarcome synovial, point de cassure X 1) code une protéine nucléaire de type antigène cancer‑testis, impliquée dans la régulation transcriptionnelle et les processus associés à la chromatine, avec des interactions rapportées qui l’associent à la répression liée aux complexes Polycomb et au contrôle épigénétique de l’expression génique. L’activité de SSX1 est associée à la modulation de programmes développementaux, de l’identité cellulaire et des états de différenciation via ses effets sur les réseaux transcriptionnels. L’expression aberrante de la famille SSX est particulièrement marquée dans le sarcome synovial, via les oncogènes de fusion SS18–SSX, qui reprogramment le remodelage de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Ainsi, SSX1 est largement étudié en biologie tumorale, en épigénétique et dans des contextes d’expression d’antigènes pertinents pour l’immuno‑oncologie, en tant que marqueur d’une dérégulation du contrôle génique.

SSX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SSX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SSX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SSX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SSX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SSX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SSX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SSX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SSX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SSX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.