SRC-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400879-NIC

NCOA1 codifica o coativador do recetor de esteroides 1 (SRC-1), um coativador transcricional que faz a ponte entre recetores nucleares ativados por ligandos e outros fatores de transcrição, ligando-os a complexos que modificam a cromatina. O SRC-1 coordena a acetilação e o remodelamento de histonas para regular programas génicos envolvidos na resposta hormonal, proliferação, metabolismo e diferenciação. Participa em redes de sinalização conduzidas pelos recetores de estrogénio, androgénio, progesterona, glucocorticoides e hormona tiroideia, e cruza-se com vias como MAPK/ERK e PI3K/AKT através de dinâmicas do coativador dependentes de fosforilação. A desregulação da expressão ou da atividade de NCOA1/SRC-1 tem sido associada a alterações na sinalização endócrina e à reprogramação transcricional observadas em múltiplos cancros e em contextos metabólicos e inflamatórios, apoiando a sua utilização como um nó mecanístico em estudos de regulação génica.

SRC-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NCOA1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NCOA1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NCOA1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NCOA1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.