Plasmide Double Nickase (h) SR-6: sc-402874-NIC

HTR6 code le récepteur humain 6 de la 5‑hydroxytryptamine (SR‑6), un récepteur couplé aux protéines G fortement exprimé dans le système nerveux central, qui se couple principalement à Gs pour stimuler l’adénylate cyclase et augmenter l’AMPc intracellulaire. Via une signalisation dépendante de l’AMPc et de la PKA, SR‑6 influence l’excitabilité neuronale et régule des programmes transcriptionnels liés à la plasticité synaptique et à la modulation des circuits. Le récepteur s’inscrit également dans des réseaux neuromodulateurs plus larges qui façonnent les processus cognitifs et affectifs, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier la dynamique des signalisations dépendantes de la sérotonine. Une signalisation GPCR sérotoninergique dérégulée, y compris des voies impliquant HTR6, a été associée dans la littérature à la biologie de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, ainsi qu’à des phénotypes cognitifs altérés dans des modèles expérimentaux.

SR-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HTR6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HTR6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HTR6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HTR6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.