Plasmide CRISPR d'Activation (h) SR-2C: sc-400886-ACT

HTR2C code le récepteur humain 2C de la 5‑hydroxytryptamine (SR‑2C), un récepteur couplé aux protéines G qui transmet principalement le signal via Gq/11 afin d’activer la phospholipase C, d’augmenter la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et d’engager des cascades de phosphorylation dépendantes de la PKC. SR‑2C influence également la signalisation MAPK/ERK et régule la libération de neurotransmetteurs en modulant l’excitabilité neuronale et la transmission synaptique dans les circuits sérotoninergiques. Par ces voies, HTR2C contribue au contrôle central de l’appétit, de l’humeur et des sorties endocrines/autonomes, et sa dérégulation a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et métaboliques dans des études expérimentales et génétiques. Ces caractéristiques font de HTR2C une cible utile pour étudier la dynamique de signalisation des GPCR, les effets de l’édition/ des isoformes du récepteur, et les interactions (crosstalk) entre voies dans des modèles cellulaires neuronaux et neuroendocriniens.

SR-2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HTR2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SR-2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HTR2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HTR2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SR-2C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HTR2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SR-2C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SR-2C dans les cellules tumorales présentant une expression de HTR2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.