Plasmide Double Nickase (h) SR-1D: sc-404213-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SR-1D correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SR-1D Double Nickase (h) et le plasmide SR-1D Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HTR1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SR-1D Antibody (H-4): sc-398809
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SR-1D | sc-404213-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SR-1D | sc-404213-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTR1D code pour le récepteur humain de la sérotonine (5‑hydroxytryptamine) 1D (SR‑1D), un GPCR couplé à Gi/o qui atténue l’activité de l’adénylate cyclase et réduit l’AMPc intracellulaire afin de moduler l’excitabilité neuronale et la libération synaptique de neurotransmetteurs. La signalisation de SR‑1D influence les voies MAPK/ERK et la régulation des canaux ioniques en aval du tonus sérotoninergique, façonnant le contrôle présynaptique de la transmission des monoamines dans les systèmes nerveux central et périphérique. Ce récepteur est étudié dans des voies qui régissent la régulation neurovasculaire et le traitement nociceptif, et une altération de la signalisation des GPCR sérotoninergiques a été associée à des mécanismes de maladies neurologiques, notamment la biologie de la migraine et des phénotypes de céphalées apparentés. La perturbation de HTR1D est également utilisée pour explorer la désensibilisation des GPCR, le trafic médié par la β‑arrestine et la régulation, à l’échelle des circuits, des réseaux sensibles à la sérotonine.
SR-1D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HTR1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HTR1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HTR1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HTR1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.