Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPPL2b (h): sc-405646

Présentation

SPPL2B code SPPL2b, une protéase aspartyl intramembranaire de la famille des peptidases de peptides signal de type « signal peptide peptidase–like », localisée aux membranes endosomales et lysosomales. SPPL2b contribue à la protéolyse intramembranaire régulée, en modulant le renouvellement des protéines membranaires et la génération de fragments peptidiques au sein du système endo-lysosomal. Par ces activités, SPPL2b est susceptible d’influencer le trafic vésiculaire, le processing des récepteurs et la signalisation en aval associée aux voies immunitaires et inflammatoires. Une protéolyse intramembranaire dérégulée et des altérations de la fonction endo-lysosomale sont pertinentes pour l’étude de la neurodégénérescence, de l’homéostasie des cellules immunitaires et du contrôle qualité des protéines membranaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPPL2b (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPPL2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPPL2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPPL2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPPL2b.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPPL2B pour l'étude de la signalisation de SPPL2b, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPPL2B essentiels à la fonction de SPPL2b
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPPL2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPPL2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPPL2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPPL2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPPL2b plasmide HDR (h) et le SPPL2b (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPPL2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPPL2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.