Particules Lentivirales d'Activation (h) SPOP: sc-401290-LAC

La SPOP humaine (speckle-type POZ protein) est un adaptateur de substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine CUL3–RBX1, qui favorise l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome d’un large éventail de protéines nucléaires et cytoplasmiques. En régulant la stabilité des protéines, SPOP influence des programmes transcriptionnels, des processus associés à la chromatine, les réponses aux dommages de l’ADN et des réseaux de signalisation, notamment des composants du récepteur des androgènes et de la voie PI3K–AKT. La perturbation de la signalisation ubiquitine dépendante de SPOP peut reconfigurer l’homéostasie cellulaire et les réponses au stress, faisant de SPOP un nœud clé pour l’étude de la protéostasie et du dialogue entre voies de signalisation. Des altérations de la fonction de SPOP et de la reconnaissance de ses substrats ont été associées à des mécanismes liés au cancer, notamment une dérégulation de l’abondance de facteurs de transcription et une sortie de signalisation aberrante dans des contextes pertinents pour la tumorigenèse.

Les particules d'activation lentivirales SPOP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SPOP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SPOP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SPOP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SPOP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SPOP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.