Plasmide CRISPR/Cas9 KO SphK1 (m): sc-423102

Présentation

Sphk1 code la sphingosine kinase 1 (SphK1), une kinase lipidique majeure qui phosphoryle la sphingosine pour produire la sphingosine-1-phosphate (S1P), modulant ainsi l’équilibre entre la S1P pro-survie et les pools de céramide/sphingosine pro-apoptotiques. La signalisation de la S1P portée par SphK1 s’entrecroise avec les voies des RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) et des récepteurs à activité tyrosine kinase, et influence MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB, les flux calciques et le remodelage du cytosquelette, lesquels régulent collectivement la prolifération, la résistance à l’apoptose, la migration et les réponses inflammatoires. Dans les systèmes murins, SphK1 est largement utilisée pour étudier le métabolisme des sphingolipides bioactifs dans la régulation immunitaire, la biologie vasculaire et les réponses au stress, notamment dans des modèles d’inflammation, de fibrose et de phénotypes liés au cancer. Une activité altérée de l’axe SPHK1/S1P est fréquemment associée à une production de cytokines dérégulée, à des anomalies de la fonction de barrière et à des signalisations liées à la tumeur, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SphK1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sphk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sphk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sphk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SphK1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sphk1 pour l'étude de la signalisation de SphK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sphk1 essentiels à la fonction de SphK1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sphk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SphK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SphK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sphk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SphK1 plasmide HDR (m) et le SphK1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sphk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sphk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.