Plasmide CRISPR d'Activation (m) SPARC: sc-423101-ACT

Mouse Sparc code SPARC, une glycoprotéine matricellulaire sécrétée qui module l’organisation de la matrice extracellulaire (MEC), le dépôt de collagène et les interactions cellule–matrice. SPARC régule l’adhésion, la migration et la prolifération en modulant la signalisation des intégrines et la disponibilité des facteurs de croissance, influençant des processus tels que la réparation des plaies, l’angiogenèse et le remodelage tissulaire. Elle est fréquemment associée à des voies contrôlant la fibrose et les réponses stromales, et sa dérégulation est liée à une homéostasie altérée de la MEC et à des microenvironnements inflammatoires. Ces propriétés font de SPARC un nœud pertinent pour étudier le comportement des cellules mésenchymateuses, les interactions de signalisation dépendantes de la MEC et la régulation du microenvironnement dans des modèles pertinents pour les maladies.

SPARC Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sparc sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SPARC Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sparc dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sparc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SPARC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sparc natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SPARC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SPARC dans les cellules tumorales présentant une expression de Sparc silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.