SPAG5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403607-ACT

SPAG5 (antígeno 5 associado a espermatozoides), também conhecido como astrina, codifica uma proteína associada a microtúbulos que se localiza no fuso mitótico e nos cinetócoros, onde auxilia o alinhamento dos cromossomos, a integridade do fuso e a segregação fiel das cromátides-irmãs. O SPAG5 participa de processos centrais de controle mitótico, incluindo a dinâmica das ligações entre cinetócoro e microtúbulos e a regulação do checkpoint do fuso, relacionando-se à progressão do ciclo celular e à capacidade proliferativa. A expressão desregulada de SPAG5 é frequentemente investigada em contextos de biologia do câncer, nos quais o estresse mitótico, a instabilidade cromossômica e a proliferação alterada são características marcantes. Por isso, SPAG5 é amplamente utilizado como alvo de pesquisa em estudos de mitose, estabilidade do genoma e vias que governam a divisão celular.

SPAG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPAG5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SPAG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPAG5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPAG5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SPAG5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPAG5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SPAG5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SPAG5 em células tumorais com expressão de SPAG5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.