Sp1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400166-ACT

ヒトのSP1は、GCボックスに結合するタンパク質である転写因子Sp1をコードしており、多様な遺伝子ネットワークにまたがるプロモーターおよびエンハンサーで、基礎転写と誘導性転写を協調的に制御します。Sp1はMAPK/ERK、PI3K/AKT、TGF-β経路からのシグナルを統合し、細胞周期の進行、アポトーシス、分化、DNA修復、ならびに酸化・代謝ストレス応答を調節します。さらに、血管新生、細胞外マトリックスのリモデリング、炎症シグナル伝達に関わる遺伝子の制御を通じて、SP1活性は細胞可塑性と組織恒常性に影響を与えます。Sp1依存的な転写プログラムの破綻は、がん化、線維化、神経変性疾患や代謝性疾患の病態と関連づけられており、SP1は転写制御の機構研究における有用な結節点（ノード）となっています。

Sp1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sp1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sp1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSp1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSp1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。