Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sox-21: sc-406354-ACT

SOX21 code Sox-21, un facteur de transcription à domaine HMG (High Mobility Group) qui module des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destin cellulaire au cours du développement embryonnaire et de l’homéostasie tissulaire. Sox-21 est étroitement associé à la différenciation neurale et épithéliale, où il s’articule avec des réseaux transcriptionnels centraux et des voies sensibles aux signaux afin de coordonner l’engagement de lignée, le maintien des progéniteurs et la maturation. En façonnant des états régulateurs de chromatine accessibles et les sorties transcriptionnelles, SOX21 influence des processus tels que la neurogenèse, la dynamique des cellules souches/progénitrices et le remodelage épithélial. Une expression dérégulée de SOX21 a été rapportée dans des contextes de différenciation anormale et de contrôle prolifératif, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier la biologie du développement et le remodelage transcriptionnel associé aux maladies.

Sox-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOX21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sox-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOX21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOX21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sox-21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOX21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sox-21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sox-21 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOX21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.