Plasmide CRISPR d'Activation (h) SOCS-1: sc-400618-ACT

Le gène humain **SOCS1** code **SOCS-1**, un régulateur intracellulaire négatif majeur de la signalisation des récepteurs aux cytokines, qui limite l’activité de la voie **JAK/STAT** grâce à la reconnaissance, médiée par le domaine **SH2**, de motifs de phosphotyrosine et au ciblage vers le système **ubiquitine–protéasome** via sa **SOCS box**. En atténuant la signalisation en aval des interférons, des interleukines et d’autres signaux inflammatoires, SOCS-1 contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire, module la fonction des cellules présentatrices d’antigène et restreint les programmes transcriptionnels inflammatoires excessifs. Une expression ou une activité dérégulée de **SOCS1** a été associée à une activation immunitaire anormale et à des contextes de signalisation oncogénique où une activation persistante de **STAT** favorise des altérations de la prolifération et de la survie. Ces propriétés font de SOCS-1 un nœud pertinent pour étudier l’inhibition par rétrocontrôle, la réponse aux cytokines et l’adaptation transcriptionnelle dans des modèles de biologie immunitaire et du cancer.

SOCS-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOCS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOCS-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOCS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOCS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOCS-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOCS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOCS-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOCS-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOCS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.