SNX9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403578-ACT

Humanes SNX9 (Sorting Nexin 9) ist ein PX-BAR-Domänen-Adaptorprotein, das die Erkennung von Phosphoinositiden mit Membranremodellierung und Aktindynamik verknüpft. Es wirkt bei der clathrinvermittelten Endozytose, indem es AP-2-/Clathrin-Komponenten mit der dynaminabhängigen Vesikelabschnürung koordiniert und endozytotische Stellen über Interaktionen mit N-WASP und verwandten Faktoren an die Arp2/3-getriebene Aktinpolymerisation koppelt. Durch diese Funktionen trägt SNX9 zur Rezeptorinternalisierung, zum Trafficking und zur Abschwächung von Signalen bei und beeinflusst damit Signalwege wie EGFR und andere RTK-gekoppelte Signalnetzwerke. Eine veränderte SNX9-Expression oder -Funktion wurde mit dysreguliertem Vesikeltransport und abweichenden Signalzuständen in Krebs- und neurobiologischen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was SNX9 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der endozytosegekoppelten Signalübertragung macht.

SNX9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNX9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNX9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNX9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNX9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNX9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNX9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNX9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNX9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNX9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.