Plasmide Double Nickase (m) SMO/Smoothened: sc-435662-NIC

Le gène murin *Smo* code Smoothened (SMO), un transducteur de signal à sept domaines transmembranaires qui relaie l’activité de la voie Hedgehog en aval de PTCH1 afin de réguler des programmes transcriptionnels dépendants de GLI, contrôlant la mise en place des structures embryonnaires, le comportement des cellules souches et progénitrices, ainsi que l’homéostasie tissulaire. L’activation de SMO influence des événements de signalisation dépendants du cil primaire et s’intègre à des voies gouvernant la prolifération, la différenciation et les décisions de destinée cellulaire. Une signalisation Hedgehog–SMO dérégulée est impliquée dans des anomalies du développement et des processus oncogéniques, notamment une croissance aberrante et une spécification de lignée anormale dans de nombreux tissus, faisant de *Smo* une cible largement utilisée pour les études mécanistiques de la régulation de la voie Hedgehog.

SMO/Smoothened Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Smo dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Smo. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Smo. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Smo.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.