SMO/Smoothened Plasmide Double Nickase (h): sc-400491-NIC

SMO (Smoothened) è un trasduttore di segnale a sette domini transmembrana che agisce a valle di PTCH1 nella via di Hedgehog per regolare programmi trascrizionali dipendenti da GLI che controllano il patterning embrionale, il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici e l'omeostasi tissutale. In assenza di ligandi Hedgehog, PTCH1 limita l'attività di SMO; il legame del ligando rimuove questa inibizione, consentendo l'accumulo di SMO e la trasduzione del segnale dal ciglio primario. Una segnalazione di SMO deregolata altera l'espressione genica dello sviluppo ed è stata collegata all'attivazione oncogenica della via e a decisioni aberranti del destino cellulare in molteplici contesti patologici. Per questo SMO umano è ampiamente studiato per la mappatura della via, la biologia della segnalazione ciliare e la regolazione delle reti trascrizionali.

SMO/Smoothened Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.