Plásmido Doble Nickase (h) SMO/Smoothened: sc-400491-NIC

SMO (Smoothened) es un transductor de señales de siete dominios transmembrana que actúa aguas abajo de PTCH1 en la vía Hedgehog para regular programas transcripcionales dependientes de GLI que controlan el patrón embrionario, el mantenimiento de células madre y progenitoras, y la homeostasis tisular. En ausencia de ligandos Hedgehog, PTCH1 restringe la actividad de SMO; la unión del ligando alivia esta inhibición, permitiendo la acumulación de SMO y la señalización desde el cilio primario. La señalización desregulada de SMO altera la expresión génica del desarrollo y se ha relacionado con la activación oncogénica de la vía y con decisiones aberrantes de destino celular en múltiples contextos patológicos. Por ello, el SMO humano se estudia ampliamente para el mapeo de la vía, la biología de la señalización ciliar y la regulación de redes transcripcionales.

SMO/Smoothened El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.