Plasmide Double Nickase (m) SMARCA4/Brg1: sc-423026-NIC

Le gène murin **Smarca4** code **SMARCA4/Brg1**, la sous-unité ATPase catalytique des complexes de remodelage de la chromatine **SWI/SNF (BAF)**, qui repositionnent les nucléosomes afin de réguler l’accessibilité des promoteurs et des enhancers. Par un remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, SMARCA4 s’intègre à des programmes transcriptionnels contrôlant la progression du cycle cellulaire, la spécification des lignages, la réplication de l’ADN et les réponses aux dommages de l’ADN. La fonction de SMARCA4/Brg1 s’articule avec des voies régies par la répression Polycomb, la signalisation p53 et des facteurs de transcription du développement, façonnant les états épigénétiques dans les différents tissus. La dérégulation des composants de SWI/SNF, dont SMARCA4, est impliquée dans la transformation oncogénique et des phénotypes développementaux, faisant de Smarca4 une cible centrale pour des études mécanistiques de la régulation génique fondée sur la chromatine.

SMARCA4/Brg1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Smarca4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Smarca4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Smarca4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Smarca4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.