Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMARCA4/Brg1: sc-400168-ACT

SMARCA4 (Brg1) code la sous-unité ATPase centrale du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF), qui repositionne les nucléosomes afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’identité cellulaire, la prolifération et la différenciation. Grâce à ce remodelage dépendant de l’ATP, SMARCA4 influence l’accessibilité des enhancers et coopère avec des facteurs de transcription définissant la lignée pour moduler l’activité de l’ARN polymérase II. Elle participe à des processus tels que la signalisation des dommages à l’ADN, les réponses au stress de réplication et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, en façonnant l’architecture de la chromatine au niveau de loci régulateurs clés. La dérégulation ou la perte de fonction de SMARCA4 est récurrente dans de nombreux contextes tumoraux, reliant une activité SWI/SNF altérée à une reprogrammation épigénétique, une instabilité génomique et une sortie aberrante des voies du développement.

SMARCA4/Brg1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMARCA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMARCA4/Brg1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMARCA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMARCA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMARCA4/Brg1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMARCA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMARCA4/Brg1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMARCA4/Brg1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMARCA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.