Smad7 Plasmide Double Nickase (h): sc-400251-NIC

SMAD7 codifica Smad7, uno SMAD inibitorio che fornisce un controllo di retroazione negativa della segnalazione TGF-β e BMP interferendo con la fosforilazione, mediata dai recettori, degli SMAD regolati dal recettore e promuovendo il turnover dei recettori. Attraverso la modulazione della trascrizione dipendente dagli SMAD, Smad7 influenza la transizione epitelio-mesenchimale, il rimodellamento della matrice extracellulare, la segnalazione immunitaria e infiammatoria e la regolazione del ciclo cellulare. Un'attività di SMAD7 deregolata è stata associata ad alterazioni delle risposte fibrotiche e a fenotipi infiammatori, nonché a ruoli dipendenti dal contesto nella progressione tumorale tramite effetti sull'output della via del TGF-β. In quanto punto di controllo della via, SMAD7 è spesso studiato per analizzare ampiezza e tempistica del segnale nelle reti canoniche TGF-β/SMAD e il loro cross-talk con le vie MAPK e NF-κB.

Smad7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.