Plasmide Double Nickase (m) Smad4: sc-421527-NIC

Smad4 chez la souris code un co‑SMAD central, médiateur transcriptionnel, qui intègre les signaux SMAD2/3 et SMAD1/5/8 activés par les récepteurs afin de réguler une expression génique dépendante du contexte en aval des voies TGF‑β et BMP. En s’associant à d’autres SMAD et à des cofacteurs se liant à l’ADN, SMAD4 pilote des programmes impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la modulation immunitaire. La perturbation de la signalisation Smad4 reconfigure la plasticité épithélio‑mésenchymateuse et l’homéostasie tissulaire, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée dans les travaux sur l’organisation du développement et les réponses transcriptionnelles associées à la fibrose. En cancérologie, l’altération de la fonction de SMAD4 est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour analyser, dans des modèles murins, la bascule de la voie TGF‑β entre freins à la prolifération et sorties transcriptionnelles pro‑invasives.

Smad4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Smad4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Smad4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Smad4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Smad4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.