Plasmide Double Nickase (h) SLP-76: sc-401421-NIC

LCP2 code pour SLP-76, une protéine adaptatrice cytosolique qui coordonne la transduction du signal en aval des immunorécepteurs dans les cellules hématopoïétiques. Après l’engagement du récepteur des lymphocytes T (TCR) et des récepteurs Fc, SLP-76 assemble des complexes multiprotéiques avec LAT, GADS, VAV1, ITK et PLCγ1 afin de relayer des cascades de phosphorylation qui induisent le flux calcique, l’activation des MAPK, le remodelage du cytosquelette et l’adhérence médiée par les intégrines. Par ces voies, SLP-76 régule l’activation et le développement des lymphocytes ainsi que la formation de la synapse immunologique, ce qui fait de LCP2 un nœud central pour l’étude de la topologie des réseaux de signalisation immunitaire. Une signalisation dépendante de SLP-76 dérégulée a été impliquée dans des phénotypes de dysfonction immunitaire et des réponses inflammatoires altérées, soulignant sa pertinence pour la recherche mécanistique en immunopathologie.

SLP-76 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LCP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LCP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LCP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LCP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.