Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO SKIP (h): sc-407373
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SKIP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SKIP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SKIP Antibody (B-6): sc-365362
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SKIP (h) | sc-407373 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
INPP5K code l’inositol polyphosphate-5-phosphatase K, communément appelée SKIP, une phosphatase des phosphoinositides qui régule la signalisation cellulaire des phosphoinositols en déphosphorylant le PtdIns(4,5)P₂ et des substrats apparentés. En modulant la composition en phosphoinositides au niveau des membranes, SKIP influence l’organisation du cytosquelette d’actine, le trafic membranaire et la transduction du signal en aval de voies telles que PI3K/AKT, qui dépendent de seconds messagers lipidiques localisés. Une activité altérée d’INPP5K a été associée à des perturbations de l’homéostasie musculaire et du neurodéveloppement, ce qui la rend pertinente pour l’étude de troubles congénitaux affectant la fonction neuromusculaire et l’architecture cellulaire. Comme les phosphoinositides coordonnent de multiples compartiments et processus, SKIP constitue un nœud utile pour disséquer le couplage membrane–cytosquelette et la dynamique de signalisation contrôlée par les phosphatases dans les cellules humaines.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SKIP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène INPP5K dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du INPP5K, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert INPP5K à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SKIP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en INPP5K pour l'étude de la signalisation de SKIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de INPP5K essentiels à la fonction de SKIP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de INPP5K pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SKIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SKIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus INPP5K. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SKIP plasmide HDR (h) et le SKIP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie INPP5K pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles INPP5K définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.