Plasmide CRISPR/Cas9 KO Six1 (m): sc-422956

Présentation

Six1 (sine oculis homeobox homolog 1) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la mise en place des plans embryonnaires et l’organogenèse chez la souris, avec des rôles marqués dans la myogenèse, la néphrogenèse et le développement des placodes sensorielles. SIX1 coordonne la spécification des lignages et les programmes de prolifération via des réseaux de contrôle transcriptionnel en interface avec des voies de signalisation du développement, notamment par des interactions avec les coactivateurs EYA et la modulation d’ensembles de gènes impliqués dans la croissance et la différenciation. Une expression ou une activité dérégulée de SIX1 est associée à des trajectoires développementales aberrantes et a été étudiée dans le contexte d’anomalies congénitales et de programmes transcriptionnels oncogéniques. Dans les cellules, les circuits transcriptionnels dépendants de Six1 influencent la progression du cycle cellulaire, la migration et les transitions d’état épithélio-mésenchymateuses, pertinentes pour la biologie du développement et la modélisation des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Six1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Six1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Six1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Six1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Six1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Six1 pour l'étude de la signalisation de Six1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Six1 essentiels à la fonction de Six1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Six1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Six1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Six1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Six1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Six1 plasmide HDR (m) et le Six1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Six1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Six1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.