Six1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402063-ACT

O SIX1 codifica a Six1, um fator de transcrição homeobox que regula programas do desenvolvimento embrionário, incluindo organogênese, miogênese e a formação de placódios sensoriais, coordenando redes de expressão gênica específicas de linhagem. A Six1 atua em circuitos regulatórios de transcrição que interagem com vias de sinalização do desenvolvimento, como WNT, FGF e TGF-β, moldando decisões de destino celular, proliferação e diferenciação. Em tecidos adultos, a expressão desregulada de SIX1 pode promover estados transcricionais aberrantes ligados à transição epitélio–mesênquima, a programas associados à invasão e a alterações no controle do ciclo celular. Como resultado, o SIX1 é amplamente estudado como um fator impulsionador da reativação de genes do desenvolvimento na biologia do câncer e como determinante de fenótipos de diferenciação específicos de tecido.

Six1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Six1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Six1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Six1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Six1 em células tumorais com expressão de SIX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.