Plasmide CRISPR d'Activation (h) SIRT7: sc-401401-ACT

SIRT7 est une désacylase nucléaire dépendante du NAD+ appartenant à la famille des sirtuines, qui régule l’organisation de la chromatine, la transcription de l’ADN ribosomique et la biogenèse des ribosomes pilotée par l’ARN polymérase I. En modulant des substrats histoniques et non histoniques, SIRT7 relie le contrôle épigénétique aux réponses au stress cellulaire, à l’homéostasie métabolique et au maintien de l’intégrité du génome, notamment via les voies de réponse aux dommages de l’ADN et au stress de réplication. Une activité altérée de SIRT7 a été associée à une prolifération dérégulée, à la protéostasie et à la fonction mitochondriale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, des phénotypes liés au vieillissement et des dysfonctionnements inflammatoires ou métaboliques. SIRT7 humaine est donc largement utilisée comme nœud d’analyse pour explorer des programmes transcriptionnels qui couplent la fonction nucléolaire au contrôle du cycle cellulaire et à l’adaptation au stress.

SIRT7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIRT7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SIRT7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIRT7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIRT7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SIRT7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIRT7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SIRT7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SIRT7 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIRT7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.