Plasmide Double Nickase (m) SIRT5: sc-427028-NIC

Le gène murin **Sirt5** code la sirtuine mitochondriale **SIRT5**, une désacylase de lysine dépendante du **NAD⁺** présentant une forte activité **désuccinylase**, **démalonylase** et **déglutarylase**, qui ajuste le fonctionnement des enzymes mitochondriales. En inversant des modifications d’acylation des lysines autres que l’acétylation, SIRT5 contribue à réguler le métabolisme central du carbone, l’oxydation des acides gras, le cycle de l’urée et la gestion des espèces réactives de l’oxygène, soutenant ainsi l’homéostasie mitochondriale en situation de stress nutritionnel et oxydatif. Une activité altérée de SIRT5 a été associée dans la littérature à une reprogrammation métabolique, à un déséquilibre rédox et à des phénotypes de dysfonction mitochondriale recoupant des voies pertinentes pour les maladies cardiométaboliques et la neurodégénérescence. Ces caractéristiques font de **Sirt5** une cible utile pour explorer le contrôle post-traductionnel des flux mitochondriaux et la signalisation d’adaptation au stress dans les cellules de mammifères.

SIRT5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sirt5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sirt5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sirt5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sirt5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.