Plásmido Doble Nickase (m) SIRP-α: sc-422514-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SIRP-α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SIRP-α (m) y el plásmido de doble nickasa SIRP-α (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Sirpa. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SIRP-α Anticuerpo (C-7): sc-376884
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SIRP-α | sc-422514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SIRP-α | sc-422514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen **Sirpa** de ratón codifica la proteína reguladora de señales alfa (SIRP-α), un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas expresado predominantemente en células mieloides, donde actúa como un punto de control inhibidor de la fagocitosis. Al interactuar con CD47, SIRP-α señaliza a través de motivos ITIM para reclutar las fosfatasas SHP-1/2, atenuando la reorganización del citoesqueleto, la señalización de integrinas y las vías de activación de la inmunidad innata que regulan la internalización y el tono inflamatorio. Este eje influye en la homeostasis de macrófagos y células dendríticas, el manejo de antígenos y la eliminación de células apoptóticas, y se estudia ampliamente en contextos como la evasión inmunitaria tumoral, la biología del trasplante y los fenotipos autoinmunes o inflamatorios. Las diferencias dependientes de la cepa y del alelo en SIRP-α de ratón también pueden modificar la compatibilidad de xenoinjertos y las respuestas inmunitarias innatas, lo que convierte a **Sirpa** en una diana frecuente en inmunología y en el desarrollo de modelos de enfermedad.
SIRP-α El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sirpa en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sirpa. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sirpa. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sirpa alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.