Particules Lentivirales d'Activation (m) Shh: sc-422926-LAC

Le gène Sonic hedgehog (Shh) code un morphogène sécrété qui orchestre la mise en place des patrons embryonnaires et la morphogenèse tissulaire en établissant des signaux dépendants de la concentration. Après maturation du ligand et sécrétion, SHH se lie à PTCH1, levant l’inhibition de SMO et activant les facteurs de transcription GLI, qui régulent des programmes contrôlant la prolifération, la différenciation et le destin des cellules souches/progénitrices. Chez la souris, la signalisation Shh est essentielle à la ventralisation du tube neural, au développement du bourgeon de membre et à l’organogenèse, et sa dérégulation perturbe les réseaux géniques du développement. Une activité aberrante de la voie SHH–PTCH–SMO–GLI est également associée à des contextes de signalisation oncogénique et au remodelage du microenvironnement tumoral, faisant de Shh un nœud clé pour l’analyse de la voie.

Les particules d'activation lentivirales Shh (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Shh dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Shh (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Shh, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Shh. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Shh ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.