Plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank2 (m): sc-431686

Présentation

Shank2 code la protéine 2 contenant un domaine SH3 et de multiples répétitions ankyrine (SHANK2), un échafaudage de la densité postsynaptique qui organise les synapses glutamatergiques en reliant les récepteurs ionotropes et les complexes d’adhésion à la signalisation en aval et au cytosquelette d’actine. Dans les neurones, SHANK2 contribue à coordonner la maturation synaptique, la morphogenèse des épines dendritiques et le remodelage dépendant de l’activité via des interactions avec les protéines de la famille PSD-95, les complexes Homer–mGluR et des voies de régulation de l’actine. La perturbation de l’échafaudage dépendant de Shank2 peut modifier la transmission synaptique excitatrice et l’homéostasie des synapses, ce qui en fait un nœud fréquemment étudié dans les programmes de connectivité et de plasticité neuronales. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé des altérations de SHANK2 à des phénotypes neurodéveloppementaux, soutenant sa pertinence pour modéliser des mécanismes de dysfonction synaptique in vivo et dans des neurones murins en culture.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Shank2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Shank2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Shank2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Shank2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Shank2 pour l'étude de la signalisation de Shank2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Shank2 essentiels à la fonction de Shank2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Shank2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Shank2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Shank2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Shank2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Shank2 plasmide HDR (m) et le Shank2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Shank2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Shank2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.