Sgo2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404058-ACT

L’SGO2 umano codifica shugoshin 2 (Sgo2), un protettore della coesina associato al centromero che contribuisce a mantenere la coesione tra i cromatidi fratelli e un’accurata segregazione dei cromosomi durante mitosi e meiosi. Sgo2 agisce nella regolazione del complesso cinetocoro–centromero, coordinandosi con segnali dipendenti da fosfatasi per contrastare il rilascio prematuro della coesina e favorire il corretto attacco al fuso e la fedeltà dei checkpoint. L’alterazione delle dinamiche di coesione regolate da SGO2 può promuovere instabilità cromosomica e aneuploidia, processi frequentemente implicati nella biologia dei tumori e nei disturbi dello sviluppo. Di conseguenza, SGO2 è studiato in vie che collegano il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e il mantenimento del genoma.

Sgo2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SGO2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sgo2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SGO2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SGO2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sgo2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SGO2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sgo2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sgo2 nelle cellule tumorali con espressione di SGO2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.