Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sgo2: sc-404058-ACT

Le gène humain **SGO2** code la shugoshine 2 (Sgo2), un protecteur de la cohésine associé au centromère, qui contribue au maintien de la cohésion des chromatides sœurs et à une ségrégation chromosomique fidèle pendant la mitose et la méiose. Sgo2 agit dans la régulation du kinétochore et du centromère, en coordination avec une signalisation dépendante des phosphatases, afin de s’opposer à une libération prématurée de la cohésine et de soutenir un attachement correct du fuseau ainsi que la fidélité des points de contrôle. Une perturbation des dynamiques de cohésion régulées par SGO2 peut favoriser l’instabilité chromosomique et l’aneuploïdie, des processus fréquemment impliqués dans la biologie tumorale et les troubles du développement. En conséquence, **SGO2** est étudié dans des voies reliant le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le maintien du génome.

Sgo2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SGO2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sgo2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SGO2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SGO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sgo2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SGO2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sgo2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sgo2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SGO2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.