SEMA6D Plasmide Double Nickase (m): sc-431980-NIC

Sema6d codifica la semaforina murina SEMA6D, un segnale di guida transmembrana che trasduce segnali attraverso i recettori plexina per regolare la comunicazione cellula–cellula dipendente dal contatto. SEMA6D modula il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione direzionale e la guida degli assoni, collegando la segnalazione semaforina–plexina all’attività delle GTPasi della famiglia Rho e alle dinamiche dell’actina a valle. Oltre alla definizione dei pattern neurali, SEMA6D contribuisce alla morfogenesi tissutale e a processi vascolari e immuno-correlati, in cui le vie di guida determinano il posizionamento delle cellule. La disregolazione della segnalazione delle semaforine, inclusa un’alterata espressione di Sema6d, viene utilizzata per indagare i meccanismi di innervazione aberrante, del traffico delle cellule infiammatorie e del rimodellamento del microambiente in modelli rilevanti per la malattia.

SEMA6D Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sema6d nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sema6d. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sema6d. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sema6d interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.