Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4A (m): sc-422880

Présentation

Sema4a code la sémaphorine-4A (SEMA4A), un signal de guidage associé à la membrane qui agit aussi comme ligand immunorégulateur influençant la communication cellule–cellule. Chez la souris, SEMA4A contribue au guidage des axones et à l’organisation des synapses, tout en modulant l’activation et la différenciation des lymphocytes T, ainsi que les interactions avec les cellules présentatrices d’antigène, via des réseaux de signalisation des sémaphorines et des voies dépendantes de récepteurs. Ces processus recoupent le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et des programmes de signalisation inflammatoire qui façonnent l’homéostasie tissulaire. Une activité dérégulée de Sema4a a été associée à des pathologies à médiation immunitaire et à des mécanismes de neuroinflammation, ce qui soutient son étude dans des modèles d’auto-immunité, de neurobiologie et d’inflammation des tissus barrières.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema4a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema4a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema4a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema4a pour l'étude de la signalisation de SEMA4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema4a essentiels à la fonction de SEMA4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema4a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema4a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA4A plasmide HDR (m) et le SEMA4A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema4a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema4a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.