SEMA3F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422879

Visão geral

Sema3f codifica a semaforina-3F (SEMA3F), uma molécula sinalizadora secretada de orientação que atua principalmente por meio de complexos de receptores neuropilina e plexina para regular a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e a migração direcional. Ao modular a atividade de GTPases da família Rho e o remodelamento de actina a jusante, a SEMA3F influencia o guiamento axonal, o padrão de vascularização e a organização de tecidos epiteliais. No microambiente imune e estromal, a sinalização repulsiva dependente de SEMA3F pode moldar o posicionamento e a motilidade celular, interagindo com os desfechos das vias de integrinas, MAPK e PI3K. A desregulação da sinalização de SEMA3F tem sido associada a fenótipos angiogênicos e invasivos alterados em modelos relevantes de doenças, o que sustenta seu uso em estudos mecanísticos de desenvolvimento e biologia tumoral.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SEMA3F (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sema3f em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sema3f, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sema3f na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SEMA3F.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sema3f para a investigação da sinalização de SEMA3F, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sema3f críticos para a função SEMA3F
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sema3f para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SEMA3F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SEMA3F Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sema3f. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SEMA3F Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SEMA3F (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sema3f para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sema3f definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.