Plasmide CRISPR d'Activation (h) SEMA3E: sc-404797-ACT

SEMA3E code la sémaphorine-3E, un signal de guidage sécrété qui transmet ses signaux principalement via les récepteurs plexines afin de réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et la navigation directionnelle. Outre ses rôles dans le guidage axonal, SEMA3E influence l’organisation du réseau vasculaire et le comportement endothélial, en s’intégrant à des voies qui contrôlent la dynamique d’adhérence et l’activité des GTPases de la famille Rho. Une signalisation SEMA3E dérégulée a été associée à une modification du potentiel invasif, des réponses angiogéniques et du remodelage du microenvironnement tissulaire dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la motilité et de la signalisation du développement. Ces fonctions font de SEMA3E un levier moléculaire utile pour explorer comment des signaux de guidage extracellulaires façonnent les transitions d’état cellulaire et l’organisation des tissus.

SEMA3E Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEMA3E sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SEMA3E Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEMA3E dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEMA3E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SEMA3E. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEMA3E natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SEMA3E au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SEMA3E dans les cellules tumorales présentant une expression de SEMA3E silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.