Plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein V (h): sc-407114

Présentation

SELENOV code la sélénoprotéine V, une protéine contenant du sélénium qui incorpore de la sélénocystéine et est liée à l’homéostasie redox cellulaire. Comme d’autres sélénoprotéines, elle est associée au contrôle du stress oxydatif et à des processus redox dépendants des thiols, qui influencent le repliement des protéines, la fidélité de la signalisation et la protection contre les espèces réactives de l’oxygène. Des altérations de la biologie des sélénoprotéines et de l’utilisation du sélénium peuvent affecter des voies impliquées dans l’inflammation et la régulation métabolique, ce qui fait de SELENOV une cible pertinente pour des études mécanistiques des réponses adaptatives au stress. Son profil d’expression et son activité redox prédite justifient son exploration dans des contextes où l’équilibre oxydatif et les réseaux protéiques dépendants du sélénium contribuent à des phénotypes cellulaires associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein V (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SELENOV dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SELENOV, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SELENOV à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Selenoprotein V.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SELENOV pour l'étude de la signalisation de Selenoprotein V, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SELENOV essentiels à la fonction de Selenoprotein V
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SELENOV pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Selenoprotein V plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Selenoprotein V plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SELENOV. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Selenoprotein V plasmide HDR (h) et le Selenoprotein V (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SELENOV pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SELENOV définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.