Plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein K (h): sc-407002

Présentation

SELENOK code la sélénoprotéine K, une petite protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui incorpore la sélénocystéine et contribue au maintien de l’homéostasie redox dans les cellules immunitaires et sécrétoires. La sélénoprotéine K participe au contrôle qualité associé au RE et est liée aux flux de calcium ainsi qu’à la palmitoylation des protéines via son interaction avec le complexe palmitoyltransférase DHHC6, influençant la signalisation des récepteurs et l’organisation membranaire. Elle contribue à une activation efficace des cellules immunitaires, aux réponses au stress oxydant et à la protéostase en conditions de stress inflammatoire ou métabolique. Des altérations de l’activité de SELENOK ont été associées à une dérégulation de la signalisation inflammatoire et à des phénotypes pertinents pour la biologie des maladies immuno-médiées et neurodégénératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein K (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SELENOK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SELENOK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SELENOK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Selenoprotein K.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SELENOK pour l'étude de la signalisation de Selenoprotein K, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SELENOK essentiels à la fonction de Selenoprotein K
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SELENOK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Selenoprotein K plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Selenoprotein K plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SELENOK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Selenoprotein K plasmide HDR (h) et le Selenoprotein K (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SELENOK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SELENOK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.