SDHAF2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-425801-ACT

Mouse Sdhaf2 kodiert SDHAF2, einen akzessorischen Faktor, der für die Flavinylierung und Reifung der katalytischen Untereinheit SDHA der Succinatdehydrogenase (Komplex II) erforderlich ist. Indem SDHAF2 den korrekten Zusammenbau und die Aktivität von Komplex II ermöglicht, unterstützt es die Kopplung des Tricarbonsäurezyklus an die mitochondriale Elektronentransportkette und beeinflusst damit die Succinatoxidation, das Redoxgleichgewicht und die respiratorische Kapazität. Eine Störung der SDHAF2-Funktion wird mit mitochondrialer Dysfunktion und veränderter Metabolit-Signalgebung in Verbindung gebracht, einschließlich einer Succinat-Anreicherung, die hypoxieabhängige und epigenetische Signalwege beeinflussen kann. Daher wird Sdhaf2 breit in der Bioenergetik, bei Antworten auf oxidativen Stress sowie in Modellen untersucht, in denen Defekte von Komplex II zur Tumorbiologie und zu Mechanismen neuroendokriner Erkrankungen beitragen.

SDHAF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sdhaf2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SDHAF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sdhaf2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sdhaf2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SDHAF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sdhaf2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SDHAF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SDHAF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sdhaf2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.