Plasmide Double Nickase (h) SDF-1/CXCL12: sc-400268-NIC

CXCL12 (SDF-1/CXCL12) est une chimiokine homéostatique qui établit des signaux directionnels pour la migration cellulaire et l'organisation des tissus, en transmettant ses signaux principalement via CXCR4 et CXCR7/ACKR3. Ses gradients régulent le trafic des leucocytes, la rétention des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques au sein des niches de la moelle osseuse, ainsi que le dialogue entre cellules vasculaires et stromales lors du développement et de la réparation. Les voies de signalisation en aval mobilisent le plus souvent PI3K–AKT, MAPK/ERK, JAK/STAT et les GTPases de la famille Rho afin de coordonner la chimiotaxie, la survie et l'adhésion. Une activité dérégulée de l'axe CXCL12 est associée à des mécanismes de maladies inflammatoires et à la biologie du microenvironnement tumoral, notamment les profils d'infiltration des cellules immunitaires et la formation de niches métastatiques, ce qui en fait une cible fréquente dans les études mécanistiques.

SDF-1/CXCL12 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CXCL12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CXCL12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CXCL12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CXCL12.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.