Plasmide CRISPR d'Activation (m) Sclerostin: sc-428914-ACT

Le gène murin Sost code la sclérostine, une glycoprotéine sécrétée produite principalement par les ostéocytes, qui agit comme un puissant inhibiteur de la voie canonique Wnt/β-caténine dans l’os. En se liant aux co‑récepteurs LRP5/6, la sclérostine antagonise l’activation des récepteurs médiée par les ligands Wnt, limitant la différenciation des ostéoblastes, le dépôt de matrice et la minéralisation du squelette, tout en contribuant au remodelage dépendant de la mécanotransduction. Sost interagit également avec le dialogue entre les voies de signalisation BMP et TGF‑β, qui façonne les programmes géniques ostéogéniques et l’homéostasie osseuse. Une activité de la sclérostine dérégulée est impliquée dans des phénotypes de masse osseuse altérée et constitue un point d’entrée mécanistique pour modéliser le développement squelettique, le remodelage et les modifications du renouvellement osseux associées à l’ostéo‑immunologie.

Sclerostin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sost sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sclerostin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sost dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sost, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sclerostin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sost natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sclerostin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sclerostin dans les cellules tumorales présentant une expression de Sost silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.