Plasmide CRISPR d'Activation (h) SC: sc-402459-ACT

Le récepteur des immunoglobulines polymériques (PIGR) code le composant sécrétoire (SC), un récepteur transmembranaire qui se lie à l’IgA dimérique et à l’IgM pentamérique à la surface basolatérale des cellules épithéliales et les transporte à travers l’épithélium en vue de leur sécrétion au niveau des muqueuses. Au cours de la transcytose, le SC est libéré par clivage protéolytique et demeure associé à l’IgA sécrétoire, renforçant l’exclusion immunitaire et protégeant les anticorps de la protéolyse dans les environnements muqueux. L’expression de PIGR est régulée par des signalisations inflammatoires et dépendantes des cytokines, notamment les voies NF-κB et JAK/STAT, reliant les réponses innées épithéliales à l’immunité adaptative des muqueuses. Une biologie PIGR/SC dérégulée est étudiée dans les contextes de dysfonctionnement de barrière et d’inflammation chronique, avec des implications pour la susceptibilité aux infections et les interactions avec le microenvironnement tumoral épithélial.

SC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIGR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIGR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIGR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIGR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SC dans les cellules tumorales présentant une expression de PIGR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.