Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPK4 (h): sc-400423

Présentation

MAPK13 code la protéine kinase 4 activée par le stress (SAPK4), une sérine/thréonine kinase de la famille des MAPK p38 qui convertit des signaux inflammatoires et de stress environnemental en réponses transcriptionnelles et post‑transcriptionnelles. SAPK4 contribue à la régulation de la signalisation associée aux cytokines, des programmes de différenciation cellulaire, ainsi qu’au contrôle, dépendant du contexte, de l’apoptose et de la prolifération via la phosphorylation d’effecteurs en aval. Au sein du réseau MAPK au sens large, MAPK13/SAPK4 s’articule avec des voies qui façonnent les réponses immunitaires innées et la biologie épithéliale. Une dérégulation de la signalisation des MAPK p38, y compris l’activité de MAPK13, a été associée à la physiopathologie inflammatoire et à des processus liés au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAPK4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAPK13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAPK13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAPK13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAPK4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAPK13 pour l'étude de la signalisation de SAPK4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAPK13 essentiels à la fonction de SAPK4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAPK13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAPK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAPK4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAPK13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAPK4 plasmide HDR (h) et le SAPK4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAPK13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAPK13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.