SAPK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400423

Übersicht

MAPK13 kodiert die stressaktivierte Proteinkinase 4 (SAPK4), eine Serin/Threonin-Kinase der p38-MAPK-Familie, die entzündliche und umweltbedingte Stresssignale in transkriptionelle und posttranskriptionelle Antworten übersetzt. SAPK4 trägt über die Phosphorylierung nachgeschalteter Effektoren zur Regulation zytokinassoziierter Signalwege, zellulärer Differenzierungsprogramme sowie zur kontextabhängigen Kontrolle von Apoptose und Proliferation bei. Als Teil des übergeordneten MAPK-Netzwerks ist MAPK13/SAPK4 mit Signalwegen verknüpft, die angeborene Immunantworten und die Epithelbiologie prägen. Eine dysregulierte p38-MAPK-Signalgebung, einschließlich der MAPK13-Aktivität, wurde mit entzündlicher Pathophysiologie und krebsassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch MAPK13 ein hilfreicher Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stresssignalgebung ist.

Das SAPK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAPK13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAPK13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAPK13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SAPK4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAPK13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SAPK4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAPK13-Exone abzielen, die für die SAPK4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAPK13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SAPK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SAPK4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAPK13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SAPK4 HDR-Plasmid (h) und SAPK4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAPK13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAPK13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.